factors affecting agrobacterium-mediated transformation of uida gene into lettuce (lactuca sativa l.)

[ ' a s r e g a r d s t h e k i n d o f u s e a n d p r o d u c t i o n o f b i o m a s s ' , ' l e t t u c e b e n e f i t s f r o m a p o t e n t i a l o f a c t i n g a s a b i o r e a c t o r i n p r o d u c i n g r e c o m b i n a n t p r o t e i n s a s w e l l a s e d i b l e v a c c i n e s . f o r t h e p r o p o s e ' , ' o n e n e e d s t o o p t i m i z e t i s s u e c u l t u r e a n d g e n e t r a n s f o r m a t i o n i n l a c t u c a s a t i v a . s e e d s o f t w o c u l t i v a r s t n ' , 9 6 , ' 3 9 a n d t n ' , 9 6 , ' 4 1 w e r e d i s i n f e c t e d i n a s o l u t i o n o f 2 . 5 % s o d i u m h y p o c h l o r i t e c o n t a i n i n g 0 . 1 % t w e e n 2 0 f o r 2 5 m i n u t e s . t h i s w a s f o l l o w e d b y t h r e e r i n s e s o f s t e r i l e d i s t i l l e d w a t e r . t h e s e e d s w e r e t h e n g e r m i n a t e d i n p e t r i d i s h e s o n f i l t e r p a p e r s o a k e d w i t h s t e r i l e d i s t i l l e d w a t e r . t h e c u l t u r e s w e r e c o n t i n u o u s l y e x p o s e d t o w h i t e f l u o r e s c e n t l i g h t a t a c o n s t a n t t e m p e r a t u r e o f 2 5 o c ' , ' f o r a m i n i m u m o f 1 6 h o u r s . w h e n a s e p t i c a l l y g e r m i n a t e d s e e d l i n g s w e r e 4 8 t o 7 2 h o u r s o l d ' , ' c o t y l e d o n s w e r e e x c i s e d n e a r t h e c o t i l e d o n a r y n o d e ' , ' a n d c u t i n t o e i t h e r 6 o r 8 p i e c e s t o e x p a n d t h e a l r e a d y e x i s t i n g w o u n d o n t h e e x p l a n t s f o r c a l l u s g r o w t h . t h e m o s t s u i t a b l e g r o w t h r e g u l a t o r s f o r c a l l u s p r o d u c t i o n a n d e m b r y o g e n e s i s w e r e 0 . 0 5 m g / l n a a ' , ' a n d 0 . 2 m g / l b a . t h e m o s t a p p r o p r i a t e g r o w t h r e g u l a t o r f o r d i r e c t r e g e n e r a t i o n a n d p r o l i f e r a t i o n w a s f o u n d o u t a s 0 . 0 5 m g / l n a a ' , ' 0 . 4 m g / l b a . t o p r o d u c e r o o t s ' , ' s h o o t s w e r e t r a n s f e r r e d t o m s m e d i u m c u l t u r i n g 0 . 2 m g / l o f n a a . s t r o n g r o o t b e a r i n g p l a n t l e t s w e r e p l a n t e d i n p o t s t o p r o d u c e s e e d s . t r a n s g e n i c p l a n t s o f l e t t u c e c u l t i v a r s ( t n ' , 9 6 , 3 9 , ' t n ' , 9 6 , ' 4 1 ) w e r e p r o d u c e d b y u s e o f a g r o b a c t e r i u m t u m e f a c i e n s v e c t o r s c o n t a i n i n g t h e ? ' , ' g l u c u r o n i d a s e ( g u s ) r e p o r t e r g e n e a n d t h e n p t i i g e n e f o r k a n a m y c i n r e s i s t a n c e a s a s e l e c t a b l e m a r k e r . h i g h f r e q u e n c y o f t r a n s f o r m a t i o n b a s e d o n k a n a m y c i n r e s i s t a n c e a n d g u s e x p r e s s i o n ' , ' w a s o b t a i n e d w i t h 7 2 ' , ' h ' , ' o l d c o t y l e d o n e x p l a n t s c o c u l t i v a t e d f o r 4 8 h w i t h a g r o b a c t e r i u m t u m e f a c i e n s s t r a i n l b a 4 4 0 4 & 2 m i n u t e d i v e f o r i n f e c t i o n a t c u l t i v a r t n ' , 9 6 , ' 3 9 . p r o g e n i e s o f t 0 a n d t 1 p l a n t s a l o n g w i t h p c r & a s s a y d e m o n s t r a t e d l i n k e d m o n o g e n i c s e g r e g a t i o n f o r k a n a m y c i n r e s i s t a n c e a n d f o r g u s a c t i v i t y . ' ]